Responsable scientifique
VIROLLE Thierry – DR INSERM – Coordinateur préclinique du projet PETRA
Membres de la plateforme
PEUX Clément – Ingénieur d’étude CNRS, spécialisé en culture d’organoïdes cérébraux (Financement 100% « Action structurante »)
LADOUX Annie – CRHC INSERM spécialisée en cellules souches
TURCHI Laurent – Ingénieur de Recherche spécialisé en culture cellulaire et pharmacologie
BERTACCI Michele – CRCN INSERM, spécialisé en développement neuronal
POLO Béatrice – AI INSERM, spécialisée en culture cellulaire
Contact
COLIN Carole – Ingénieure de Recherche – Manager du projet PETRA
Description
La plateforme PETRA«TECH» – NICE est spécialisée dans l’étude des cellules souches tumorales et de leur interaction avec le microenvironnement tumoral. Elle propose son expertise en modèles précliniques humains en 3D et en modèles animaux. Les modèles offerts actuellement sont des modèles précliniques de glioblastome. Des modèles d’organoïdes cérébraux vascularisés permettant d’étudier les interactions des cellules de glioblastomes avec le microenvironnement tumoral sont en cours de développement.
Les modèles cellulaires 3D et prestations in vitro proposés
Cultures de sphéroïdes
Ces modèles sont réalisés à partir d’exérèse chirurgicale, en collaboration avec le service de Neurochirurgie du CHU de Nice (Dr Almairac, Pr Paquis, Pr Fontaine)eten association avec le service d’anatomopathologie (Pr Burel Vandenbos, Pr Michels). Après dissociation de la tumeur, la suspension cellulaire est cultivée dans un milieu défini approprié pour le maintien des cellules souches cancéreuses de gliome (CSG). Après apparition des sphéroïdes, les cellules sont sélectionnées sur leur capacité d’autorenouvèlement. Les CSG expriment divers marqueurs de cellules souches et d’agressivité comme OLIG2, SOX2, NANOG et OCT4. Elles peuvent également exprimer d’une façon plus hétérogène des marqueurs de surface comme CD133 et A2B5. Les cellules dérivées de patients que nous proposons sont caractérisées par CGH array. Le statut de la mutation de P53 est également connu. Ces cellules sont capables d’effectuer des cycles de différenciation et dé-différenciation en fonction du milieu dans lequel elles sont cultivées.
Méthodes analytiques :
- Cryoconservation pour remise en culture ultérieure, cryocoupes, marquages en immunofluorescence (plateforme d’histopathologie de l’iBV)
- Inclusion en paraffine pour analyses histopathologiques, marquages immunohistochimiques, analyses moléculaires (plateforme d’histopathologie de l’iBV)
- Dissociation pour analyses en cytométrie en flux (cytomètre en flux Fortessa Beckton Dickinson) (Plateforme de cytometrie en flux de l’iBV)
- Tests fonctionnels
- Tests pharmacologiques
- Vidéomicroscopie (Microscope à fluorescence Zeiss AxioObserver Z1 & spinning disk confocal microscope)
Cultures d’organoïdes cérébraux
Les organoïdes cérébraux sont obtenus à partir de cellules pluripotentes induites humaines. Lorsque ces structures sont arrivées à maturation, elles sont mises en présence de sphéroïdes de glioblastomes, ce qui permet d’étudier leurs interactions, l’infiltration des CSG et la formation de foyers. Des organoïdes cérébraux enrichis en neurones corticaux sont produits en routine. Des organoïdes cérébraux enrichis en neurones du tronc cérébral sont en cours de développement.
Méthodes analytiques :
- Marquages en immunofluorescence
- Tests fonctionnels
- Tests pharmacologiques
- Vidéomicroscopie (Microscope à fluorescence Zeiss AxioObserver Z1)
Les modèles d’organoïdes cérébraux vascularisés (en cours de développement)
Les organoïdes cérébraux et vasculaires sont réalisés à partir de cellules pluripotentes induites humaines. Les organoïdes vasculaires et cérébraux sont obtenus séparément selon des protocoles publiés et modifiées au laboratoire (Equipe T Virolle, iBV) pour améliorer la spécialisation des cellules. Des « assembloïdes » seront réalisés en associant un organoïde cérébral avec 2 organoïdes vasculaires.
Des CSG seront co-cultivées avec ces organoides cérébraux vascularisées comme décrit au point précédent.
La technique :
Méthodes analytiques :
- Marquages en immunofluorescence
- Expression de marqueurs
- Tests fonctionnels
- Tests pharmacologiques
- Vidéomicroscopie (Microscope à fluorescence Zeiss AxioObserver Z1)
Les modèles et prestations d’expérimentation animale proposés
Les CSG dérivées de patients sont rendues bioluminescentes et greffées en orthotopique (intracrânien) dans des souris immunodéficientes. L’initiation et la croissance tumorale est suivie par imagerie bioluminescente sur animaux vivants. Les CSG forment des tumeurs possédant des caractéristiques de la tumeur d’origine : infiltration, formation de foyers tumoraux et de micro-territoires tumoraux enrichis soit en cellules souches/progénitrices, soit en cellules différenciées.
La faisabilité et le coût des projets seront étudiés au cas par cas.
- Modèle de greffe de tumeurs dans des souris immunodéficientes
- Traitement pharmacologique
- Prélèvement des cerveaux et organes
- Cryoconservation pour analyses moléculaires, analyses biochimiques, marquages en immunofluorescence sur cryocoupes
- Inclusion en paraffine pour analyses histopathologiques, marquages immunohistochimiques, analyses moléculaires
En pratique
La plateforme technique PETRA«TECH» – NICE est localisée au sein de l’équipe “Cancer Stem Cell Plasticity and Functional Intra-tumor Heterogeneity”, au 8ème étage du bâtiment Sciences Naturelles de la Faculté des Sciences du campus Valrose.
Cette plateforme est ouverte aux équipes académiques, cliniques et aux compagnies privées et sociétés industrielles.
Pour toute demande de conseil, collaboration, prestation, ou formation à une technique, merci de renseigner le formulaire de contact.